@MASTERSTHESIS{ 2016:237347269, title = {Expressão gênica de membros do sistema IGF em óocitos e células do cumulus provenientes de vacas de diferentes genótipos leiteiros}, year = {2016}, url = "http://tede2.unifenas.br:8080/jspui/handle/jspui/163", abstract = "Nos últimos anos observou-se um aumento expressivo do uso da Produção In-vitro de Embriões (PIVE) em raças bovinas leiteiras. Neste contexto, é conhecido que as diferenças na quantidade e no potencial de desenvolvimento oocitário entre fêmeas de raças europeias (Bos taurus taurus) e zebuínas (Bos indicus taurus) afetam consideravelmente a eficiência e a viabilidade econômica da PIVE. Sabendo que o sistema dos fatores de crescimento semelhantes à insulina (IGF) está relacionado à capacidade de desenvolvimento dos oócitos, o objetivo deste estudo foi avaliar a expressão de genes do sistema IGF nos complexos cumulus oócitos (COCs) oriundos de doadoras das raças Gir, Holandesa e mestiças F1 (1/2 Holandesa x 1/2 Gir). Os COCs imaturos foram recuperados por aspiração folicular guiada por ultrassonografia (OPU) em fazendas na região sul do estado de Minas Gerais, Brasil. Os oócitos e as células do cumulus provenientes de grupos de 30 COCs (n=4/raça) foram mecanicamente separados e armazenados em nitrogênio líquido. Foram selecionados para as análises somente COCs classificados como grau 1 e viáveis. O RNA total foi extraído de “pools” de 30 oócitos e das células do cumulus correspondentes utilizando o kit RNeasy® (Qiagen). A expressão dos genes alvo (IGF1 e IGF2), seus receptores (IGFR1 e IGFR2), proteínas de ligação aos IGFs (IGFBP2 e IGFBP4) e proteína de inativação IGFBPase ( também conhecida como “Proteína Plasmática Associada a Gravidez”; PAPP-A), foi investigada por RT-PCR em tempo real utilizando o sistema Power Sybr® Green PCR Master Mix (Applied Biosystems) e normalizada pela Ciclofilina-A (CYC-A). A quantificação relativa do RNAm foi determinada pelo método de ΔΔCt com correção de eficiência. Os efeitos das diferentes raças sobre a expressão dos genes alvo nos oócitos e nas células do cumulus foram testados por ANOVA e os grupos foram comparados pelo teste de Tukey-Kramer HSD. O nível de significância foi considerado P<0,05. Nos oócitos houve uma maior expressão do RNAm codificante para IGFR1 em doadoras Gir em relação às 1/2 Holandesa x 1/2 Gir e Holandesas. A abundância relativa de RNAm do IGF2, IGFR2 e IGFBP4 foi maior nas células do cumulus de vacas Holandesas quando comparado às vacas Gir e 1/2 Holandesa x 1/2 Gir. A expressão do RNAm da enzima PAPP-A foi maior nas células do cumulus e nos oócitos das doadoras Gir e 1/2 Holandesa x 1/2 Gir em comparação com as Holandesas. Não houve alteração na expressão dos genes IGF1, IGF2, IGFR2, IGFBP2 e IGFBP4 nos oócitos, assim como dos genes IGF1, IGFR1 e IGFBP2 nas células do cumulus entre as raças. Em conclusão, a maior expressão de PAPP-A nos oócitos e células do cumulus de COCs provenientes de doadoras das raças Gir e 1/2 Holandês x 1/2 Gir associada à baixa expressão de IGFBP4 nas células do cumulus destas, sugere uma degradação mais eficiente das IGFBPs, resultando em maior biodisponibilidade dos IGFs em COCs imaturos das raças Gir e meio sangue (1/2 Holandesa x 1/2 Gir) quando comparado com COCs da raça Holandesa.", publisher = {Universidade José do Rosário Vellano}, scholl = {Programa de Mestrado em Reprodução, Sanidade e Bem-estar Animal}, note = {Pós-Graduação} }